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細胞焦亡(pyroptosis)是一種新的程序性細胞死亡方式,其依賴于Gasdermin家族蛋白形成質膜膜孔的、可調控的細胞死亡,經常但并不總因炎癥性Caspase的活化而完成。其形態(tài)學特征在電鏡下觀察,可清楚看到在細胞質膜破裂前,焦亡的細胞形成大量小泡,即焦亡小體。之后細胞膜上會形成孔隙,細胞膜破裂,內容物流出。 細胞形態(tài)學:根據(jù)細胞形態(tài)變,可初步鑒定細胞是否發(fā)生焦亡。通過光學顯微鏡觀察,可看到胞漿破裂或有大量細胞碎片的存在。 LDH釋放檢測:乳酸脫氫酶(LDH)是存在于幾乎所有細胞內的一種酶,當細胞膜破裂時,LDH能被釋放到培
乳腺癌的發(fā)病率逐年增高,并成為中國女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,是人們常說的“紅顏殺手”。其中,三陰性乳腺癌惡性程度較高,患者生存預后較差,易出現(xiàn)早期復發(fā)和轉移,且既往缺乏有效的針對性治療策略,素有最“毒”乳腺癌之稱。近日,復旦大學腫瘤醫(yī)院邵志敏教授、江一舟教授課題組攜手復旦大學基礎醫(yī)學院教育部/衛(wèi)健委/醫(yī)科院醫(yī)學分子病毒學重點實驗室趙超課題組,發(fā)現(xiàn)微生物代謝產物氧化三甲胺(TMAO)可以激活抗腫瘤免疫,提高三陰性乳腺癌免疫治療療效。這意味著微生物代謝產物TMAO有望成為三陰性乳腺癌臨床免疫治療的新策略,助推免疫治療。該項重要研究成果已在北京時間3月12日凌晨在國際權威期刊Cell Metabol
常見小鼠采血方法 小鼠是科研實驗中常用的實驗動物,但由于其體積小,血管細,采血難度大,進而影響采血的質量。 ELK簡要總結了常見的小鼠采血方法,僅供參考: 一只成年小鼠的循環(huán)血量大約是1.5~2.5ml,大約體重的 6~8%。在對營養(yǎng)狀況良好的小鼠進行采血時,單次采血量最多可以到達循環(huán)血量的10%,(例:若20克小鼠,它的總血量約占1.2-1.4毫升,即每次取120ul-140ul血液不會對小鼠有太大的影響)。采血之后應該給予溫熱的等滲溶液補充,可以在2~3個星期內恢復原有的水平。兩周采血量小于血液循環(huán)的10%,單周小于7.5%,小鼠血液循環(huán)7
? 組織勻漿定義:將分化的細胞群用物理機械手段或其它方法,使細胞破碎,細胞內容物釋放,與細胞碎片形成的固液混合形式的濃稠液體。 一、取適量組織塊,用預冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.4)沖洗,去除表面殘留的血液與雜質。(很多用戶疑惑,這個適量,到底是多少?ELISA試劑盒檢測中:血清或細胞上清樣本用量100μL/指標(單孔);組織用量15mg/指標(單孔),差不多干枯綠豆大小。?)具體老鼠各器官大小可見下圖。 二、將組織塊稱重,再剪切成盡可能的小碎塊,以便充分勻漿; 三、可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果:
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作,可以簡單地回答樣本中有多少蛋白質/多肽/抗體這一基本問題,是科研中比較常用的一種檢測方法。而這種簡單的分析方法的核心,就是標準曲線。沒有它,我們的實驗就變成了一個二元的“是/不是”測試。有了它,我們可以深入研究生物反應的細節(jié)。那么,是什么使得標準曲線如此強大呢?讓我們在ELISA的背景來討論這個問題。 簡單地說,標準品就是一系列已知目標蛋白數(shù)量的陽性對照。例如,如果對人類IgG進行ELISA檢測,標準曲線將包含逐漸減少的已知量的人類IgG,它會讓你立刻得出一系列的結論。 1.我的EL
NF-kB(核因子激活的B細胞的k-輕槌增強)在細胞因子誘導的基因表達中起關鍵性的調控作用,它調控的基因編碼:急性期反應蛋白、細胞因子、細胞粘附分子、免疫調節(jié)分子、病毒癌基因、生長因子、轉錄和生長調控因子等。通過調控多種基因的表達,NF-kB參與免疫反應、炎癥反應、細胞凋亡、腫瘤發(fā)生等多種生物進程。 NF-kB家族有由cRel, RelA (p65) , RelB, NF-kB1 (p50)、NF-kB2 (p52)組成,它們在N端都具有Rel同源結構域,其中cReI, ReIA (p65)和ReIB存在轉錄激活區(qū)(TAD),可正向調節(jié)基因表達;p52和p50分別由前體蛋白p100、
PCR技術介紹: 聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)是在體外酶促擴增特定DNA片段的技術,由美國Kary Mullis及其同事于1985年發(fā)明。熱穩(wěn)定性Taq DNA聚合酶的應用和自動化裝置的發(fā)明與完善,使PCR技術進入實用階段。該技術的發(fā)明和廣泛應用,大大推動了分子生物學各相關學科的發(fā)展,發(fā)明者也因此獲得了1993年的諾貝爾化學獎。 隨著PCR技術的成熟,派生了不少相關技術。這類技術具有敏感、特異、快速和簡單等優(yōu)勢,在微生物檢驗中的應用越來越廣,不少國家將其納入檢驗的標準方法;
品系背景∶C57BL/6N 品系構建策略∶ 在小鼠PD-1基因位點敲入人源PD-1胞外域序列,保留小鼠跨膜域和胞內域,構建嵌合型PD-1人源化小鼠模型。 品系說明∶ hPD-1在小鼠體內具有正常的生理表達和調節(jié)模式。 PD-1胞外域人源化,利于hPD-1靶向藥物的識別。 保留小鼠PD-1胞內域,保證正常的胞內信號轉導。 小鼠靶基因不表達,避免交叉反應。 小鼠的免疫系統(tǒng)功能健全。 研究應用∶ 本模型可用于評估hPD-1靶向藥物在免疫健全小鼠體內的有效性及安全性∶ 與人源化腫瘤細胞系聯(lián)用 例如∶與MC38-hPD-L1腫瘤細胞
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